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技術干貨:2023ELISA實驗重點注意事項

點擊次數:12382   發布時間:2023/3/14 9:45:42

ELISA試劑盒以其靈敏度較高,特異性好的特點已廣泛用于科研實驗研究,越來越多的科研單位和高校畢業論文都選擇用ELISA試劑盒作為研究課題。但在實驗中也有很多小細節會影響到實驗結果,下面就和大家談談實驗室中ELISA試劑盒的注意事項。

1.適宜的溫度
血清標本宜在新鮮時檢測,嚴重溶血標本禁用。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達頂峰。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應板不宜疊放,以確定各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應,邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結果,將質控放在非邊緣位置。

2.如何處理
凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關;EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

3.關于采集
血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。

4.有效期
通常在沒有開封,有效期為6個月,但根據實驗需求,試劑盒內酶標條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在實驗后1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準,保質期內所有組分都確保是穩定的。

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